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SANTÉ ET SCIENCES DE LA VIE

Étiquette de fusion pour augmenter la solubilité et faciliter la purification des protéines

La surexpression de protéines recombinantes provoque souvent la formation de corps d'inclusion composés de protéines insolubles, ce qui la production à grande échelle de protéines pour applications thérapeutiques.

Pour améliorer la solubilité et faciliter la purification de protéines "difficiles à solubiliser", l'équipe du Prof Christian Salesse a développé une étiquette de fusion très soluble permettant la purification de protéines recombinantes en une seule étape. Ce nouvel outil, TagR (un seul domaine recoverine) or 2XTagR (copies de recoverine en tandem), est disponible dans des vecteurs de clonage où le gène d'intérêt peut y être fusionné. La recoverine est une protéine qui effectue une transition conformationnelle en liant le calcium. En absence de calcium, les résidus hydrophobes de l'extrémité N-terminale sont séquestrés dans une poche hydrophobe mais, une fois liés au calcium, ils peuvent se lier à des structures hydrophobes (membranes ou résines de chromatographie).

Dans Escherichia coli, les rendements de protéines fusionnées à TagR ou 2XTagR peuvent dépasser 30 mg/L et ces protéines peuvent être purifiées efficacement en une seule étape, Alternativement, après quelques lavages, un traitement protéolytique in situ (colonne) permet d'éluer une protéine recombinante hautement purifiée, en présence ou non de détergent.

Références

  • Salesse C and L Cantin (2017-2018). Recoverin as a fusion protein tag to improve expression, solubility and purification of proteins. WO2017011909A1, CA2991804A1, US20180208634A1, EP3325627A1, JP2018521690A. Assignee: Université Laval.

  • Calvez P, TF Schmidt, L Cantin, K Klinker, and C Salesse (2016). Phosphatidylserine allows observation of the calcium-myristoyl switch of recoverin and its preferential binding. J Am Chem Soc 138: 13533-13540.

  • Desmeules P, S-É Penney, and C Salesse (2006). Single-step purification of myristoylated and nonmyristoylated recoverin and substrate dependence of myristoylation level. Anal Biochem 349: 25-32.

Gso 14 532

Opportunitiés

Durand son développement, il a été démontré que TagR était plus efficace que des étiquettes de fusion telle la glutathion-S-transférase (GST) ou la protéine liant le maltose (MBP).

SOVAR et l'Université Laval sont à la recherche d'un partenaire pour le co-développement ou la commercialisation de la technologie.

Availables resources

Le laboratoire de Prof Salesse a construit une séries de vecteurs de clonage contenant TagR ou 2XTagR.